本制品为经优化和测试的用于哺乳动物细胞或组织蛋白提取的蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物组合,包含了广谱的丝氨酸、半胱氨酸和酸性蛋白酶抑制剂/氨基肽酶抑制剂,以及丝氨酸/苏氨酸、酪氨酸、酸性及碱性磷酸酶抑制剂。本制品提供独立包装的0.25M EDTA(如用于检测金属蛋白酶活性,则不宜添加EDTA)
本制品使用便捷,通常以1:50的比例分别把蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品,50X),磷酸酶抑制剂(50X)和0.25M EDTA加入裂解液中,即可用于哺乳动物细胞或组织蛋白的提取,并有效抑制蛋白降解。
哺乳动物细胞或组织提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等,容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰,从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。
组分 | 3×2mL | 3×10mL |
蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品,50X) | 2mL | 10mL |
磷酸酶抑制剂混合物(50X) | 2mL | 10mL |
0.25M EDTA,pH8.0 | 2mL | 10mL |
保存:-20℃,有效期1年。
- 蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品,50X):52.5mM AEBSF,40μM Aprotinin,2.5mM Bestatin,0.75mM E64,1mM Leupeptin and 0.75mM Pepstatin A in DMSO。
- 磷酸酶抑制剂(50X):250mM sodium fluoride,50mM sodium pyrophosphate,50mM β-glycerophosphate and 50mM sodium orthovanadate in H2O。
本蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物为50X的储存液,使用时按照1:50的比例加入到裂解液中(例如,1mL裂解液中加入20μL蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物以及20μL磷酸酶抑制剂混合物),混匀后即可使用。含有蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配,不宜配制后冻存待后续使用。根据需要,0.25M的EDTA也按照1:50的比例加入到裂解液中。待所需的抑制剂添加完毕并混匀后,就可以开始进行哺乳动物细胞或组织的裂解和蛋白提取。
不同类型的蛋白提取物中含有不同类型的蛋白酶。例如,哺乳动物细胞提取物中通常含有高丰度的丝氨酸蛋白酶,细菌细胞提取物通常含有较多的丝氨酸蛋白酶和金属蛋白酶,哺乳动物组织提取物中主要含有丝氨酸、半胱氨酸和金属蛋白酶,植物提取物中常含有大量的丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶,还有一些含有天冬氨酸蛋白酶。为此我公司针对不同类型样品的蛋白提取,提供了不同类型的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂混合物以供选择,具体请参考附表1。
附表1.不同类型的蛋白提取用蛋白酶、磷酸酶、去乙酰化酶等抑制剂混合物:
货号 | 产品名称 |
YT964 | 蛋白酶抑制剂混合物(通用型,100X) |
YT965 | 蛋白酶抑制剂混合物(通用型,质谱兼容,50X) |
YT966 | 蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用,100X) |
YT967 | 蛋白酶抑制剂混合物(植物样品抽提用,100X) |
YT968 | 蛋白酶抑制剂混合物(真菌或酵母抽提用,100X) |
YT969 | 蛋白酶抑制剂混合物(细菌抽提用,100X) |
YT960 | 蛋白酶抑制剂混合物(His-Tag蛋白纯化用,100X) |
YTB4015 | 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型,50X) |
YTB4017 | 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型,质谱兼容,50X) |
YTB4018 | 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用,50X) |
YTB4016 | 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(植物样品抽提用,50X) |
YTB4019 | 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(真菌或酵母抽提用,50X) |
YTB4020 | 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(细菌抽提用,50X) |
YT970L | 磷酸酶抑制剂混合物A (50X) |
YT970M | 磷酸酶抑制剂混合物B (50X) |
YT970N | 磷酸酶抑制剂混合物C (50X) |
YT970S | 磷酸酶抑制剂混合物D (50X) |
YTB4030 | 去乙酰化酶抑制剂混合物(100X) |
附表2.常用蛋白酶、磷酸酶、去乙酰化酶抑制剂的具体相关信息:
名称 | 分子量 | 目标酶家族 | 抑制类型 |
AEBSF | 239.5 | 丝氨酸蛋白酶 | 不可逆 |
Aprotinin | 6511.5 | 丝氨酸蛋白酶 | 可逆 |
Bestatin | 308.38 | 氨基肽酶 | 可逆 |
E64 | 357.4 | 半胱氨酸蛋白酶 | 不可逆 |
Leupeptin | 475.6 | 丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶 | 可逆 |
Pepstatin A | 685.9 | 天冬氨酸蛋白酶 | 可逆 |
EDTA | 372.24 | 金属蛋白酶 | 可逆 |
Phenanthroline | 198.22 | 金属蛋白酶 | 可逆 |
Phosphoramidon | 587.5 | 金属蛋白酶 | 可逆 |
Sodium fluoride | 41.99 | 酸性磷酸酶 | 可逆 |
Sodium pyrophosphate | 221.9 | 丝氨酸/苏氨酸磷酸酶 | 不可逆 |
β-glycerophosphate | 306.11 | 丝氨酸/苏氨酸磷酸酶 | 可逆 |
Imidazole | 68.2 | 碱性磷酸酶 | 可逆 |
Sodium molybdate | 205.9 | 酸性磷酸酶 | 不可逆 |
Sodium tartrate dihydrate | 230.1 | 酸性磷酸酶 | 可逆 |
Sodium orthovanadate | 183.91 | 碱性和酪氨酸磷酸酶 | 可逆 |
(-)-p-Bromotetramisole oxalate | 373.22 | 碱性磷酸酶 | 不可逆 |
Cantharidin | 196.20 | 蛋白磷酸酶2A | 可逆 |
Microcystin-LR | 995.17 | 蛋白磷酸酶1和蛋白磷酸酶2A | 可逆 |
Calyculin A | 1009.17 | 蛋白磷酸酶1和蛋白磷酸酶2A | 可逆 |
Trichostatin A | 302.37 | class I/II HDAC | 可逆 |
EX-527 | 248.71 | SIRT1 over SIRT2 &SIRT3 | 可逆 |
Nicotinamide | 122.12 | class III HDAC | 可逆 |
Sodium butyrate | 110.09 | class I/II HDAC | 可逆 |
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